Обычная версия сайта
Размер шрифта
A-
A+
Интервал
-
+
Цвет сайта
Ц
Ц
Ц

Муниципальное дошкольное образовательное учреждение "Детский сад "Огонёк" г. Надыма"
ДЕТСКИЙ САД "Огонёк"
Год основания01.06.1984 годЯзыки образованияРусский


Качество эмбрионов для переноса


Качество эмбрионов для переноса: классификация и шансы на имплантацию

Результативность программ ЭКО зависит от многих факторов, главный из которых – эмбриологический. Искусственно оплодотворенные бластоцисты плохого качества редко имплантируются в матку, что снижает вероятность успеха процедуры. Именно поэтому важно тщательно подбирать клинику и следовать рекомендациям репродуктолога во время подготовки к проведению протокола.

Существуют критерии оценки качества бластоцист, отбираемых для подсадки в полость матки. По какому принципу их классифицируют, как они формируются и насколько хорошо приживаются?

Какие факторы влияют на характеристики эмбрионов при проведении ЭКО?

В протоколе ЭКО на получение качественных эмбрионов оказывают влияние:

  • Эмбриональные факторы, не подлежащие контролю со стороны специалистов. Это хромосомные аномалии, при которых бластоциста не приживается, отторгается маткой. Выявить подобные нарушения у Трехдневных или пятидневных эмбрионов помогает предимплантационная генетическая диагностика. На успех процедуры также оказывают влияние сбои в активации генома, что приводит к остановке деления клеток эмбриона на 3-и сутки. Чтобы избежать неудач при подсадке, бластоцисты подсаживают на 5-й день после оценки того, как морула делится в течение 2-х предыдущих дней.
  • Внешние причины (квалификация персонала, оснащенность лаборатории, плохо подготовленные среды для культивации, неправильный режим температуры и влажности).

Классы эмбрионов по качеству

Перенос эмбрионов производится на 3-и, чаще – 5-е сутки после слияния родительских гамет. Разработана классификация этих стадий развития. Для обозначения применяют специальную маркировку. Это индивидуальный набор букв (процент фрагментации – отделения от клеток фрагментов цитоплазмы, которые не несут генный материал) и цифр (число клеток эмбриона).

Трехдневные эмбрионы классифицируют по таблице качества:

Класс А: отличное качествоКласс B: хорошее качествоКласс C: среднее качествоКласс D: плохое качество
Нет безъядерных фрагментовФрагментация до 20%Фрагментация 20-50%Безъядерных клеток более 50%

Например, запись «4В» оценивают как четырехклеточный эмбрион хорошего качества с умеренной фрагментацией. Чем больше качественных эмбрионов получено в протоколе, тем лучше. Самые достойные (по мнению специалистов лаборатории) отбирают для подсадки, остальные замораживают для подстраховки. В случае неудачи их используют при новых попытках ЭКО, что позволяет избежать дополнительной гормональной стимуляции яичников.

Пятидневные бластоцисты маркируют комбинацией цифр и двойных букв:

  • Качество оценивают по размеру бластоцисты в баллах. Всего 6 баллов, где 1 – наиболее ранняя бластоциста, а 6 – с завершившимся процессом хетчинга.
  • Отсутствие дефектов и плотность обозначают, как и у трехдневных эмбрионов, буквами А, В, С, D. Бластоциста А — наилучшая по заявленному критерию.
  • Расположение клеток, отсутствие в них включений обозначается буквами А, В, С и D. Здесь А – эмбрион с плотными межклеточными связями и отсутствием включений.

Расшифровать обозначения несложно. Например, запись «1АВ» означает хороший эмбрион в стадии ранней бластоцисты с незначительными дефектами. Бластоцисты хорошего качества – 3АА, 4АА, 3АВ, 4АВ, среднего — 3АВ, 3ВВ, 4ВВ, 3ВС, 4ВВ, 2СС.

Каким образом при ЭКО происходит оценка качества эмбрионов?

Первый критерий отбора эмбриона – деление клеток яйцеклетки на два бластомера сразу после момента оплодотворения. Если этот факт зафиксировать не удалось, или образуется больше клеток, эмбрион считают некачественным.

Как репродуктологи оценивают хороший или плохой для имплантации эмбрион во время ЭКО? Для этого рассматриваются несколько критериев:

  • внешний вид – клетки должны быть правильной формы и одинаковыми по объему, а их внешняя оболочка не может иметь утолщений;
  • включения – вакуоли и другие клеточные структуры считаются неблагоприятным признаком, в этом случае зиготы могут не вступать в стадию дробления, или происходит разрушение клеток;
  • соответствие количества клеток дню развития, равномерность их деления (хорошо, если промежуток между тремя и четырьмя клетками короткий — это свидетельствует о том, что бластомеры на стадии двух клеток поделились равномерно);
  • отношение безъядерных клеток к нормальным в процентах (фрагментация 25% и ниже – вариант нормы, при превышении этого показателя эмбрионы культивируют до 5 суток, у них также есть шансы на удачную имплантацию).

Способы улучшения качества эмбрионов при проведении ЭКО

Качество бластоцист, полученных в лабораторных условиях, зависит от полноценности родительских половых клеток. На их здоровье влияет множество факторов:

  • внешние: плохая экология, стрессы, радиация, регулярная смена часовых поясов, работа на вредном производстве;
  • внутренние: избыток или недостаток массы тела, прием гормонов для стимуляции овуляции, ослабленный иммунитет, нездоровый образ жизни, заболевания репродуктивной системы, при которых может ухудшиться качество ооцитов, возраст 35 лет и более;
  • правильная подготовка к ЭКО: родителям следует пройти рекомендованные репродуктологами обследования.

Все это значит, что для улучшения качества эмбрионов будущим родителям следует позаботиться о собственном здоровье и самочувствии. Подготовку к ЭКО следует начинать за 2-3 месяца до сбора биоматериала, поскольку мужские половые клетки созревают около 70 суток.

Важно соблюдать следующие условия:

  • исключить проживание в неблагоприятных с экологической точки зрения районах;
  • избегать стрессовых ситуаций;
  • правильно питаться: в меню должны быть диетические, легко усваиваемые блюда, белковые продукты (вегетарианство снижает качество половых клеток);
  • исключить вредные привычки;
  • скорректировать вес.

Вероятность имплантации эмбрионов разного качества

Использование качественных эмбрионов повышает успех ЭКО, однако их отбор по классификации не всегда играет решающую роль. Протокол считается удачным, если 40% оплодотворенных эмбрионов достигли бластоцисты хорошего качества. Однако и при полученных эмбрионах плохого качества факт беременности не стоит исключать. Известны случаи, когда перенос первоклассных бластоцист заканчивался неудачей, а подсадка эмбрионов третьего класса вела к успешному приживлению и вынашиванию здоровых малышей.

vseprorebenka.ru

Оценка качества эмбрионов в программах ЭКО - Материнская забота

А так как различные манипуляции с эмбрионом человека – это передний край современной науки, можете представить себе сложность терминологии, которую используют эмбриологи в своей повседневной деятельности.

Ясности не добавляет  и обилие различных классификаций и методов оценки качества используемых клеток.

Мы постараемся доступным языком объяснить, что подразумевается под непонятными сочетаниями букв и цифр и дать понимание того, на основе каких данных врачи принимают решения и дают прогнозы на исход программ ЭКО.

Хотим сразу предупредить — ни в коем случае не стоит забывать, что для того, чтобы самостоятельно оценить перспективы и принять решение о переносе эмбриона нужно быть настоящим специалистом, имеющим помимо специального образования достаточный опыт. В каждом конкретном случае решение и прогноз основывается на совокупности всех известных данных и чаще всего является коллективным решением врача и эмбриолога.

сложность состоит в том, что каждому этапу развития эмбриона соответствует своя система оценки качества и способ записи этой оценки. И для того что бы понимать обозначения вроде «8с» необходимо хотя бы немного разобраться в содержании этих этапов и сопутствующих терминах.

На первом этапе эмбриолог оценивает признаки оплодотворения после проведенной процедуры ЭКО, ИКСИ, ИМСИ или PICSI. На этом этапе в эмбрионе оценивают наличие, количество, симметричность, внутреннее строение и внешний вид пронуклеусов.

Пронуклеусы это ядра мужской и женской половых клеток еще не слившихся и несущих одинарный набор хромосом. По их количеству и внешнему виду оценивают жизнеспособность эмбриона и перспективы развития патологий.

В норме их должно быть два, они должны иметь относительно равные размеры, находиться рядом и иметь внутри т.н. «ядрышки» — пронуклеоли, тоже в определенном количестве и расположенные определенным образом.

На этом этапе может формироваться множество патологий, например, при присутствии только одного пронуклеуса оплодотворение и не сможет произойти, ведь именно это образование и есть носитель генетического материала, а без участия противоположного пола размножаться мы еще не научились.

Пронуклеусов может оказаться и три. Такие эмбрионы часто несут аномальный, тройной набор хромосом и нежизнеспособны. Обычно они погибают до имплантации (прикрепления к стенке матки) или приводят к замершей беременности.

Такие эмбрионы отбраковываются и не используются в программах ЭКО.

День второй

После слияния генетического материала происходит дробление клетки на две равноценные. Такие клетки называются бластомерами.

Качество эмбриона на этой стадии оценивается по форме, относительным размерам бластомеров и по степени фрагментации. Под уровнем фрагментации понимается объем эмбриона, который занимают безъядерные фрагменты цитоплазмы (внутренней среды клетки).

Упрощая, можно представить себе эмбрион как мешок с капустой и яблоками, где в роли кочанов выступают бластомеры, а яблоки будут теми самыми безъядерными фрагментами цитоплазмы. Чем меньше в мешке яблок, чем плотнее «мешок набит капустой», тем выше оценивается качество эмбриона и его способность к развитию.

Самая распространенная классификация содержит сочетание букв A-B-C-D, обозначающее качество и степень фрагментации эмбриона, и цифр, обозначающих количество бластомеров в эмбрионе.

  • Тип А — эмбрион отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов
  • Тип В — эмбрион среднего качества с фрагментацией до 20%
  • Тип С — эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50%
  • Тип D — эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50%

Запись 4а будет означать — эмбрион отличного качества, содержащий 4 бластомера и без фрагментации.

День третий

На третьи сутки эмбрион обычно состоит уже из 7-9 бластомеров. В этот период эмбрион начинает полноценно выполнять свою генетическую программу, и именно с этим связано большое количество остановок развития.

Возможно я вас удивлю, но общее число генетических ошибок, возникающих в процессе размножения человека весьма велико. Наш геном невероятно сложен и в процессе размножения, часто возникают ошибки.

К счастью, эволюцией в нас заложен спасительный механизм, благодаря которому большинство эмбрионов с генетическими нарушениями просто останавливаются в развитии.  Это явление даже получило собственное название – «Блок развития».

Качество эмбрионов на третий день развития описывается аналогично предыдущей стадии. Например, эмбрион лучшего качества будет описываться как 8а.

День четвертый

На 4-й день развития в естественных условиях эмбрион уже должен был бы попасть из маточных труб в полость матки.

К этому времени, в большинстве случаев, он уже состоит из 10-16 клеток. Происходит процесс компактизации —  структура эмбриона уплотняется, а поверхность становится гладкой.

Эмбрион в этой стадии называется морула (от латинского morulae — тутовая ягода) и действительно напоминает ягодку.

К концу этой стадии внутри морулы начинает образовываться полость, начинается процесс кавитации (от лат. cavita — пустота).

На 4-й день развития эмбриона, в случае необходимости проведения генетической диагностики, эмбриолог с помошью специального инструмента делает отверстие в оболочке эмбриона. Эмбрион, продолжая развиваться, выпускает за пределы оболочки несколько клеток, которые эмбриолог во время процедуры биопсии, забирает и отправляет на генетический анализ.

Биопсия проводится на 5-6 день развития эмбрионов, когда они уже находятся в стадии бластоцисты.

Эта процедура совершенно безопасна для эмбриона и никак не влияет на его дальнейшее развитие. По достижении определенной стадии зрелости эмбрион замораживается до получения результатов генетического исследования и в дальнейшем используется в зависимости от этих данных.

Современный уровень технологии криоконсервации позволяет замораживать и размораживать эмбрионы совершенно без  негативных последствий. Напротив, именно криоконсервация позволяет сегодня широко использовать генетическую диагностику в программах ВРТ.

Это может быть интересно:

Боровая матка при бесплодии

День пятый

К тому моменту, когда полость внутри морулы начинает достигать 50% объема эмбриона, он начинает называться бластоцистой.

На этой стадии, как правило, происходит перенос эмбрионов в полость матки или их криоконсервация.

Бластоциста чаще всего формируется на 5 сутки (в норме в промежутке от конца 4-го дня по начало 6-го).

Бластоциста, в отличии от предыдущих стадий, уже состоит из двух групп клеток, трофобласта и внутренней клеточной массы.

Трофобласт (Трофэктодерма)– наружный слой бластоцисты, однослойный эпителий окружающий внутреннюю полость, который в дальнейшем будет отвечать за внедрение эмбриона в эндометрий матки и дальнейшее развитие из него плаценты и других внезародышевых оболочек.

Из внутренней клеточной массы — эмбриобласта, будут в дальнейшем развиваться органы и ткани организма будущего младенца.

Ооцит, а в дальнейшем развивающийся эмбрион окружает плотная блестящая оболочка (ZP). В процессе роста полость внутри эмбриона расширяется, оболочка разрывается и бластоциста начинает выходить из нее. Этот процесс называется «хэтчинг» — вылупление.

Качество эмбриона на этой стадии оценивается по размеру внутренней полости и степени проникновения за оболочку, плотности и количеству клеток внутриклеточной массы и трофоэктодермы. Первому параметру соответствует цифровое обозначение, второму и третьему – буквенное.

Степень зрелости бластоцисты:

  • 1 степень — ранняя бластоциста, полость бластоцисты меньше половины объема эмбриона.
  • 2 степень — полость бластоцисты больше половины объема эмбриона.
  • 3 степень — Полость полностью занимает объем эмбриона.
  • 4 степень — расширенная бластоциста. Полость бластоцисты становится больше и начинает истончаться ZP.
  • 5 степень — трофэктодерма начинает проникать через ZP.
  • 6 степень — вылупившаяся бластоциста, покинувшая ZP.

Внутриклеточная масса (ВКМ):

Важно, чтобы клетки эмбриобласта были многочисленными и плотно сгруппированными.

ВКМ можно представить, как кучку теннисных мячей внутри футбольного. Чем плотнее сгруппированы теннисные мячи и чем их больше, тем выше качество эмбриона.

  • А — плотно упакованная с большим количеством клеток.
  • В — более свободная группировка среднего количества клеток.
  • С — незначительное количество клеток

Трофэктодермальный слой:

Ее можно сравнить с поверхностью кожаного мяча, чем больше сегментов, из которых сшит мяч и чем они мельче – тем лучше оценивается качество.

  • А — много клеток, формирующих трофэктодерму.
  • В — немного клеток.
  • С — незначительное количество больших клеток.

Пример записи — (4АА) — расширенная бластоциста, вкм — плотно упакованная с большим количеством клеток, много клеток формирующих трофэктодерму.

Как вы успели заметить, развитие эмбриона —  непростой процесс, сопряженный зачастую с большими трудностями. Так программа ЭКО считается удачной, если 40% от количества правильно оплодотворенных эмбрионов достигли стадии бластоцисты хорошего качества.

В связи с этим, хотелось бы обратить ваше внимание на очевидные преимущества использования криотехнологий в протоколах ВРТ.

Получив несколько эмбрионов высокого качества, сегодня есть возможность перенести в полость матки один или два, а остальные заморозить.

Такая процедура даст возможность при не наступлении беременности, сделать следующую попытку переноса минуя большинство дорогостоящих и не самых полезных для здоровья женщины этапов.

Источник: https://altravita-ivf.ru/stati/ocenka-kachestva-embrionov-v-programmah-eko.html

Оценка качества ооцитов и эмбрионов

Все пациенты интересуются качеством полученных  клеток, а в дальнейшем и качеством эмбрионов. Однако данный вопрос многофакторный и не имеет однозначного ответа. Начнем с начала. Первый вопрос, который задают пациенты, когда к ним в палату после процедуры забора ооцитов приходит эмбриолог, звучит всегда одинаково: «А клетки у меня хорошие?».

Хочется сразу заметить, что на этот вопрос очень сложно ответить на данном этапе программы ВРТ. Первичная оценка ооцита основана на непосредственном визуальном анализе морфологии ооцит-кумулюсного комплекса. При получении ооцитов эмбриолог смотрит на клетки через бинокулярный микроском с незначительным уровнем увеличения.

Выглядит это вот так:

В данной ситуации оценить детально качество ооцитов не представляется возможным. Эмбриолог может только делать предположения. Поэтому оценка ооцитов на этапе проведения трансвагинальной пункции яичников не проводится.

После забора ооцитов эмбриолог определяется с тем, каким методом проводить оплодотворение полученных клеток.

Метод оплодотворения выбирается на основании показателей мужского материала. Если показатели спермограммы снижены – выбирается метод ICSI.

Суть его заключается в том, что эмбриолог очищает ооциты от клеток кумулюса и с помощью специальных инструментов, работая на специальном микроскопе, вводит морофологически хороший, активно-подвижный сперматозоид внутрь клетки. Перед тем как ввести сперматозоид в клетку, его обездвиживают.

Данный метод оплодотворения предлагается также парам с бесплодием неясного генеза и пациентам, планирующим проведение преимлантационной генетической диагностики. Помимого этого,  ИКСИ может быть проведено по желанию пациента.

При хороших показателях спермограммы проводится оплодотворение методом ЭКО. В чашке со специальной средой соединяют сперматозоиды и ооциты, а оплодотворение происходит естественным способом.

Итак, поговорим более подробно о зрелости и качестве ооцита.

Созревание ооцита до состояния, когда он способен к оплодотворению, происходит в процессе стимуляции суперовуляции, проводимой врачом гинекологом-репродуктологом. Не все ооциты в процессе стимуляции достигают зрелости.

  • Способны оплодотворятся только ооциты, находящиеся в стадии метафазы 2 процесса мейоза. Их обозначают как М2.

Зрелый ооцит выглядит так

  • Ооциты не достигшие зрелости имеют отличия от ооцита М2, которые эмбриолог способен увидеть только при выполнении оплодотворения методом ICSI. Незрелые ооциты имеют 2 вида: это клетка находящаяся в метафазе 1 мейоза (М1) и так называемый герминальный везикул (GV) ооциты в профазе I деления мейоза, определяемые по наличию зародышевого пузырька или ядерной оболочки в цитоплазме.

М1  

GV

 При оплодотворении методом ЭКО такую оценку не проводят. Возможность оценить клетки в данной ситуации возникает только утром следующего дня, а в это время не всегда возможно понять, какими клетки были в момент пункции, т.к. они имеют возможность пройти процесс дозревания в условиях инкубатора.

Что такое качество ооцита

Качество ооцита характеризует внешний вид цитоплазмы, вителлинового слоя, полярного тельца. Гомогенная цитоплазма с однородным цветом и отсутствием гранулярности характеризует хорошее качество ооцита. Вакуоли, темная окраска, всевозможные включения, деформация или гранулярность расцениваются при  морфологической оценке качества ооцита как негативные признаки.

Ооцит плохого качества, с гранулированной цитоплазмой и вакуолью большого размера в центре. 

Оценка оплодотворения

Оценка оплодотворения проводится утром следующего за пункцией дня. Этот день считается 1-м днем эмбрионального развития.

Возможность понять, произошло ли оплодотворение клетки, появляется через 18 часов после оплодотвоерния и характеризуется формированием пронуклеусов. Эмбрион первых суток развития называется зиготой.

На этот день эмбриолог оценивает «правильность» оплодотворения. Нормально оплодотворившийся ооцит содержит 2 пронуклеуса. Все остальные варианты считаются отклонением. 

Триплоидный эмбрион (3pn)

Аномально оплодотворившиеся эмбрионы исключаются из культивирования.

Оценка качества эмбрионов 2-3 дня развития

Начиная со вторых суток эмбрионального развития начинается фаза дробления.

 Дробление — это синхронное быстрое деление эмбриона на равные крупные клетки. Эти клетки называются бластомерами. Оценка качества эмбриона производится по равномерности бластомеров.

Чем более равномерные бластомеры содержит эмбрион, тем лучшим считается его качество.

Оценку эмбрионов данных суток развития осуществляют по количеству бластомеров (обозначается цифрой) и по дополнительным критериям, таким как равномерность бластомеров и наличие фрагментации (оценивается латинскими буквами a,b,c,d и их комбинацией).

Эмбрион хорошего качества выглядит так.

4-е сутки эмбрионального развития

На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 16-18 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются, и поверхность эмбриона сглаживается. Этот процесс называется компактизацией.

Важно понимать, что до 3-х суток дробление эмбриона происходит механически, каждая клетка делится пополам, черпая энергию из запасов  ооцита.

Начиная с 4 суток эмбрионального развития начинается дифференциация клеток эмбриона, часть из них сформируют зародыш, остальные будут обеспечивать возможность имплантации и формирования плаценты.

На данном этапе эмбрионы наиболее чувствительны к отрицательным воздействиям.

Качество бластоцисты, которая сформируется из морулы, оценить практически невозможно.

Оценка качества морулы проводится по характеристикам компактизации:

  • А — эмбрион полностью компактизован. Клеточные мембраны видны нечетко.
  • В — компактизовано более 75% бластомеров. Эмбрион сохраняет сферичную форму и гладкую поверхность.
  • С — частичная компактизация (около 50% бластомеров).
  • D — компактизация менее 50% бластомеров. Различимы фрагменты и некомпактизовавшиеся бластомеры. 

Морулы отличного качества

Морула плохого качества

Далее внутри морулы начинает формироваться полость. Когда эта полость достигает достигает 20% от ее объема, эмбрион называется бластоцистой. В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4-х по середину 6-х суток развития, но чаще это происходит на 5-е сутки. В редких случаях возможно формирование бластоцисты к 7-м суткам эмбрионального развития.

 Бластоциста состоит из двух популяций клеток, таких как: трофэктодерма (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотное образование из клеток внутри бластоцисты).

Из трофэктодермы сформируется в дальнейшем плацента и все зародошевые оболочки. Из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка.

На данном этапе развития эмбрион оценивают по 3 критериям:по размеру полости, качеству трофэктодермы и качеству внутриклеточной массы. 

Размер полости оценивают цифрой от 1-ого до 4-х. Внутриклеточную массу и трофэктодерму оценивают буквами от А до С. Первая буква в оценке качества будет относится к внутриклеточной массе, вторая – к качеству трофэктодермы.

Если бластоциста успела совершить «хетчинг» (разрыв оболочки, окружающий эмбрион), такой бастоцисте присваивается цифра 5. Если же бластоциста успела полностью выбраться из оболочки после хетчинга, такую бластоцисту обозначат цифрой 6.

Размер полости имеет меньшее значение в определении качества эмбриона, чем буквенная классификация. Ввиду того, что эмбрионы имеют индивидуальные особенности, они могут развиваться неравномерно. Любой размер полости определяется как вариант нормы.

Буквенные обозначения следует понимать так: наивысшее качество оценивается буквой А, наихудший вариант развития внутриклеточной массы и трофэктодермы обозначается буквой С.

Важно понимать, что критерии оценки эмбрионов носят субъективный характер. Даже эмбрионы, оцененные по классификации как эбмрионы  среднего и ниже среднего качества, могут дать полноценную беременность. 

Бластоцисты хорошего качества

3АА

4АА

5АА

5АА

6АА

Бластоцисты среднего качества

1АВ

 2ВВ

Бластоцисты плохого качества

2ВС

3ВС

  2СС

Источник: http://nova-clinic.ru/otsenka-kachestva-ootsitov-i-embrionov/

Качество эмбриона косвенно прогнозируется с момента пункции фолликулов. Получив ооцит-кумулюсный комплекс уже субъективно можно судить о пригодности яйцеклетки к оплодотворению. Более точная диагностика полноценности происходит при ЭКО ИКСИ, когда перед интрацитоплазматической инъекцией ферментным раствором растворяют кумулюсные клетки.

  • От чего зависит качество?
  • Факторы, оказывающие влияние
  • Критерии для оценки
  • Классификация эмбрионов по качеству для ЭКО на 3 и 5 сутки

От чего зависит качество эмбрионов?

В первую очередь качество эмбрионов зависит от полноценности половых клеток (мужских и женских).

Неблагоприятные факторы, влияющие на способность половых клеток оплодотвориться и давать здоровую беременность:

  • Экология.
  • Интоксикации – курение, алкоголь, бытовая химия, лекарственные препараты, растворители, бензин.
  • Гинекологические заболевания – СПЯ, эндометриоз – гормональнозависимые процессы, оказывающие влияние на качество ооцитов.
  • Ослабленный иммунитет.
  • Хроническое переутомление.
  • Избыточный вес. Происходит нарушение гормонального баланса.
  • Ограничение в пище. Вегетарианство, пост создают дефицит аминокислот, витаминов, микроэлементов.
  • Радиация – самый неблагоприятный фактор – нарушает физиологичность процессов деления и роста клеток организма, в особенности тех, которые быстро делятся;
  • Частая смена климата и часового пояса приводят к хроническому стрессу.
  • Гормональная стимуляция овуляции.

Важно! Пациенты должны полностью выполнять рекомендации врача по проведению стимуляции овуляции. Пропущенная инъекция или сделанная не вовремя – снижает вероятность получения ооцитов при пункции, качество яйцеклеток, а следовательно, и зародышей для переноса.

Биохимическая беременность после ЭКО: что это такое, причины

Большое количество клеток при пункции фолликулов, в большинстве случаев, говорит об их низком качестве. Крайне редко бывает так, что из 10–15 полученных яйцеклеток оплодотворяются все и получается 10–15 бластоцист отличного или хорошего качества.

Для того чтобы улучшить качество эмбрионов для переноса перед входом в протокол ЭКО необходимо избегать неблагоприятного влияния перечисленных факторов или свести их к минимуму.

Что влияет на качество эмбрионов при ЭКО?

Непосредственно в протоколе ЭКО на качество эмбрионов и остановку их развития влияют две группы причин.

  1. Неконтролируемые или эмбриональные:
  • Хромосомные нарушения у эмбриона. При естественном зачатии боле 50% зигот имеют хромосомные аномалии. А женщины просто не подозревают насколько часто они бывают беременны. Плохого качества эмбрионы не приживаются и их отторжение неминуемо. При этом месячные могут приходить в срок или с задержкой, а объем выделений не меняться или немного увеличиваться.
  • При ЭКО заранее трудно прогнозировать генетические характеристики пятидневных или трехдневных эмбрионов. Для этого существует преимплантационная генетическая диагностика – ПГД, когда до эмбриотрансфера – подсадки в полость матки проводится исследование генетического кода и происходит отбраковка некачественных единиц. Но для проведения ПГД есть свои показания, исследование не проводят в обязательном порядке, чаще всего к нему прибегают после неудачных предыдущих попытках. Остановка развития возможна на этапе культивации и после подсадки в матку, несмотря на то, что бластоцисты оценивались как «хорошие» или «отличные».
  • Дефекты внутриклеточных структур: митохондрий, нитей хромосом.
  • Сбои в активации собственного генома. Обычно это происходит на третьи сутки. До этих пор деление бластомеров инициировалось материнскими запасами ооцита. Нарушение активации генома – одна из возможных причин остановки деления и резкого ухудшения качества эмбриона. Исходя из этих фактов подсадку часто проводят после продленной культивации на 5 день, чтобы проверить, как морула переживет 4 сутки.
  • Оснащенность лаборатории современным оборудованием в достаточном количестве.
  • Среды для культивации прямо виляют на качество эмбрионов, их развитие. Существуют среды для продленной культивации step-by-step, которые отличаются по составу в зависимости от стадии развития и моносреды, используемые от начала и до конца культивации. Но даже самая лучшая среда может тормозить развитие или ухудшать качество эмбрионов, при этом влияя на приживаемость в матке и имплантацию.
  • Температурный режим;
  • Газовый состав воздуха;
  • Бесперебойная работа нескольких инкубаторов;
  • Профессионализм и слаженность работы в коллективе специалистов.

Как происходит оценка качества эмбрионов при ЭКО?

Оценка качества эмбрионов при ЭКО происходит ежедневно. У ЭКО ИКСИ – есть преимущество – эмбриолог точно знает время оплодотворения в отличие от классического ЭКО, так как проводит процедуру самостоятельно. Это позволяет вести наблюдение за развитием с момента оплодотворения и оценивать эффективность развития более точно.

Сейчас существует оборудование, позволяющее вести запись дробления, которая используется для выбора самого качественного эмбриона.

Характеристики, полученные при оценке, записываются в журнал, чтобы иметь возможность отслеживать динамику. Сразу после оплодотворения – слияния полярных телец яйцеклетка должна поделиться и образоваться два бластомера.

Если этого не происходит или образуется больше клеток – эмбрион оценивается как некачественный.

Для определения хороший эмбрион или плохой существует много критериев:

  • Внешний вид. Клетки должны быть правильной, равной и симметричной формы, внешняя оболочка – без утолщений.
  • Соответствие дню развития по количеству клеток.
  • Степень фрагментации – процентное соотношение безъядерных клеток (их еще называют кусочки цитоплазмы) к нормальным бластомерам (клеткам). Цитоплазматическая фрагментация бластомеров – это отсоединение от клетки фрагментов цитоплазмы, окруженной мембранной, но без ядерного содержимого. В норме каждый бластомер должен иметь ядро. Чем выше процент фрагментации, тем хуже прогноз для дальнейшего развития. Считается, что 25% фрагментации – вариант нормы. Часто мелкие фрагменты могут опять участвовать в дальнейшем построении других клеток. Фрагментация более 25% – признак снижения жизнеспособности. Тем не менее, фиксируются случаи, когда зародыши с высокой степенью фрагментации на 5 и 6 день становятся качественными или бластоцистами. Поэтому фрагментированные эмбрионы не отбраковываются а культивируются до 5–6 суток. У них есть шанс.
  • Размеры. Клетки должны быть равными по объему и правильной формы.
  • Наличие включений. Любые включения – неблагоприятный признак. Вакуоли – цитоплазматические включения, окруженные мембранной и содержащие жидкость, снижают частоту формирования хороших эмбрионов. Зиготы с выраженными вакуолями могут не вступать в дробление или происходит цитолизис – разрушение клеток.
  • Равномерность деления, чем короче промежуток времени эмбрион имеет непарное количество бластомеров, тем лучше. Например, короткий промежуток между тремя и четырьмя клетками говорит о том, что два бластомера на двухклеточной стадии поделились равномерно. Кроме этого, деление должно происходить в определенное время.

Классификация эмбрионов по качеству

Классификаций эмбрионов по качеству существует много, но преимущественно используют две классификации: для оценки трехдневных и пятидневных эмбрионов.

Классификация трехдневных (и двухдневных) эмбрионов происходит по количеству клеток (соответствие дню развития) и степени фрагментации.

0 – день пункции Нормальное количество бластомеров Класс (тип) эмбрионапо степени фрагментации Процент фрагментации Характеристика, качество эмбриона
2 сутки 2-4 A Отсутствует Отличное, без фрагментации
3 сутки 4-10 B До 25% Хорошее с содержанием безъядерных фрагментов
4 сутки более 8, чаще 10-16 C 25-50% Удовлетворительное (среднее) с фрагментацией
D Более 50% Неудовлетворительное, низкое с высокой степенью фрагментации

Запись выглядит так: 6А, 4B, 4C, где цифра – количество клеток, а буква соответствует степени фрагментации. Расшифровывается аббревиатура так: класс 6A – шестиклеточный эмбрион отличного качества без фрагментации, класс 4B – четырехклеточный эмбрион хорошего качества с содержанием безъядерных элементов, класс 4C – четырехклеточный эмбрион удовлетворительного качества с фрагментацией.

Классификация пятидневных эмбрионов или бластоцист

Качество эмбрионов на 5 день оценивается по трем критериям:

  • размеру бластоцисты (цифровое обозначение) – стадия экспансии;
  • качеству внутриклеточной массы (первое буквенное обозначение);
  • качеству трофобласта или трофоэктодермы – тонкого слоя клеток, из которых образуются внезаредышевые органы (второе буквенное обозначение).

На 4 сутки у морулы инициируется процесс компактизации, а ближе к концу 4 суток начинается процесс кавитации. Это означает, что межклеточные связи становятся более прочными, а внутри появляется полость.

Вскоре клетки разделятся на внутриклеточную массу (ВКМ) и трофоэктодерму. На 5 сутки внешне ВМК выглядит в виде островка у наружной оболочки. А трофоэктодерма – окружает образованную полость.

Из нее формируются плодные оболочки, внезародышевые органы, она ответственна за имплантацию.

Стадия экспансии Характеристика
1 Ранняя бластоциста – полость занимает около 50% объема
2 Средняя — полость занимает более половины объема, но по отношению к внутриклеточной массе не намного ее превышает
3 Экспандированная – полость занимает большую часть бластоцисты, при этом ее объем в 2 и более раза превышает объем делящегося эмбриона. Зона пеллюцида (блестящая оболочка) истончена.
4 Бластоциста с начавшимся хетчингом (выклевом из белковой оболочки)
5 Блатоциста, в хетчинге после ПГД
6 Бластоциста с завершившимся хетчингом

Классификация эмбрионов по качеству ВКМ и трофоэктодермы

Класс Характеристика ВКМ Класс Характеристика трофоэктодермы
A Плотно упакована, без включений, хорошо визуализируется A Хорошо организован, однослойный и многоклеточный
B Хорошо различима, присутствуют дефекты в виде: включений, малого количества клеток, небольшой объем, неплотно упакована B Клетки трофобласта расположены в несколько слоев, неравномерно или их меньше, чем должно быть в норме
C Неразличима или присутствуют серьезные дефекты в структуре C Имеют место включения, вакуоли или небольшое количество клеток
D Дегенеративная внутренняя клеточная масса D Дегенеративный трофобласт

Таким образом, бластоциста 5CD – эмбрион в хетчинге после ПГД, с серьезными дефектами ВКМ и дегенеративным трофобластом, а 3BB – экспандированная бластоциста с хорошо различимой ВКМ, содержащей дефекты и многослойным трофобластом.

Светлана Стас

Читайте статьи по теме:

Криоконсервация эмбрионов

Развитие эмбриона по дням: ЭКО под микорскопом

Развитие эмбриона после переноса в матку по дням

Поздняя имплантация при ЭКО

ЭКО после гиперплазии эндометрия

Подсадка эмбрионов при ЭКО

Боль в животе после пункции фолликулов

Удачная подсадка эмбрионов: эндометрий и окно имплантации

Источник: https://stanumamoy.com.ua/kachestvo-jembrionov-pri-eko-klassifikacii/

Классификация эмбрионов для переноса

Шанс успешного ЭКО зависит от многих факторов, важнейшим из которых является качество эмбриона. Эмбрионы плохого качества реже имплантируются в матку, значит шансы наступления беременности могут значительно снижаться.

Качество эмбрионов зависит от биологического материала и профессионализма врача. Поэтому очень важно внимательно выбирать клинику и ответственно подходить к рекомендациям врача в период подготовки к ЭКО.

Для выявления качества эмбрионов в процессе ЭКО существует специальная классификация. По ней врач оценивает состояние бластоцист и выбирает, какие лучше перенести в полость матки. Рассмотрим, какого качества бывают эмбрионы, как они формируются и приживаются.

  • 1 Формирование
  • 2 Категории
  • 3 Перенос

Формирование

В момент оплодотворения сперматозоидом яйцеклетка превращается в зиготу. Оплодотворения могут проводить в пробирке, либо при помощи вспомогательных методов ИКСИ и ПИКСИ.

В течение первых 24 часов зигота пытается делиться и в конце концов она раздваивается и образуются бластомеры. Уже на этом этапе врач может выбрать качественные эмбрионы, которые не отстают в развитии. Если зигота делится слишком медленно, то это является признаком нарушения.

Эмбрион продолжает активно дробиться, пока не образуется 8 бластомер. На этом этапе могут сформироваться однояйцевые близнецы. Как только бластомеры перестают дробиться, эмбрион превращает в морулу. Следующим этапом внутри эмбриона образуется полость и эмбрион продолжает дробиться, он превращается в бластоцисту из 16 и более клеток.

На этапе бластоцисты зародышу необходимо прикрепиться в полости матки, чтобы начать питаться от организма матери и продолжить расти. Такое состояние наступает на 5 день после оплодотворения.

Категории

При культивации эмбрионов врач производит условную оценку бластоцист. Это помогает выбрать самые качественные клетки для дальнейшей подсадки. Врач оценивает степень зрелости, внутриклеточную массу и толщину наружного слоя. Выставляя оценку из одной цифры и двух букв соответственно.

Рассмотрим, что означают эти цифры и буквы.

1 — не зрелая, полость составляет половину объема;

2 — бластоциста не больше, чем дробящийся эмбрион;

3 — бластоциста намного больше дробящегося эмбриона, полость большая;

4 — полость занимает всю бластоцисту, она начинает пробиваться через оболочку;

5 — бластоцисты продолжает разрывать оболочку;

6 — бластоциста без оболочки.

Первая буква А характеризует содержимое клетки, то есть ту массу, из которой будет в дальнейшем формироваться ребенок:

А — качественная, клеток много;

В — относительно качественная, имеет небольшие отклонения;

С — наблюдаются серьезные нарушения;

D — очень плохое качество бластоцисты.

Вторая буква описывает состояние внутриклеточной оболочки, от которой в последствии будет зависеть процесс прикрепления плода к стенке матки.

А — отличное качество, слой состоит из большого количества клеток;

В — есть небольшие отклонения, например, клеток меньше, либо они располагаются в два слоя;

С — клеток мало, слой плохого качества;

D — очень плохое качество слоя.

Таким образом, можно сделать вывод, что самый качественный эмбрион будет с обозначением 4АА и 5AA. Допустимы к подсадке все бластоцисты, кроме самых плохих и незрелых, который по определению не смогут имплантироваться.

Перенос

Перенос эмбрионов может проводиться не только на 5 сутки на стадии бластоцисты. В некоторых случаях может быть рекомендован более ранний перенос — на 3 сутки.

Культивирования эмбриона до стадии бластоцисты позволяет выбрать максимально качественные клетки, так как многие из них погибают в искусственных условиях. Подсадка качественных эмбрионов увеличивает шанс наступления беременности.

Но если женщина уже несколько раз неудачно прошла ЭКО с пятидневными бластоцистами, ей может быть рекомендован перенос трехдневных эмбрионов. Возможно, что им будет легче развиваться в естественных условиях и они выживут, сформировав здорового ребенка.

Стоит отметить, что классификация эмбрионов при ЭКО не является приговором. Даже если были получены эмбрионы плохого качества, беременность все равно может наступить. Часто врачи встречаются с ситуацией, когда женщина не может забеременеть с первоклассными бластоцистами. Но при переносе эмбрионов 3 класса беременность успешно наступала и рождался здоровый ребенок.

Источник: https://1ivf.info/ru/eko/klassifikatsiya-embrionov-dlya-perenosa

Многим бесплодным парам врачи рекомендуют применять процедуру культивирования. Что такое культивирование эмбрионов – это один из вопросов, который будет обсуждаться в данной статье.

Культивирование

Начало культивирования зародышей происходит на следующий день после забора фолликулов. Врачом-эмбриологом производится оценка качества эмбрионов при ЭКО. Затем соединяются женские и мужские половые клетки, через некоторое время врач рассматривает под микроскопом скорость деления биоматериала.

Дата переноса бластоцист назначается в зависимости от количества биоматериала. Классификация эмбрионов по качеству при ЭКО определяется сутками.

Культивирование эмбрионов – это один из этапов ЭКО, поддерживающий жизнедеятельность зародыша перед их подсадкой в матку.

Зигота помещается в жидкость, схожую по температурному режиму и составу в маточных трубах. Создается подобная жидкость в лабораторных условиях. Чтобы клетки не погибли раньше времени, они постоянно находятся под присмотром медицинского персонала.

Какого качества бывают эмбрионы:

  1. 2 сутки – при этом контуры бластомеров четкие, форма – правильная, высокая способность имплантации;
  2. 3 сутки – бластомеры и цитоплазмы неровные, нормальная способность имплантации;
  3. 4 сутки – удовлетворительная способность имплантации;
  4. более 4 суток – неудовлетворительная способность имплантации.

Чтобы выбрать самые жизнеспособные зародыши, стараются использовать как можно больше яйцеклеток.

Качество

5 клеточный эмбрион считается нормой и достаточно часто применяется в медицинской практике. Для того, чтобы процедура ЭКО прошла успешно, обязательно проводится культивирование гамет. Качество эмбрионов для переноса при ЭКО зависит от многих факторов.

От чего зависит качество эмбрионов при ЭКО:

  1. экология;
  2. вредные привычки;
  3. наличия заболевания половых органов;
  4. иммунная система;
  5. лишний вес;
  6. несбалансированное питание;
  7. стрессовые ситуации;
  8. гормональные сбои.

Классы эмбрионов в ЭКО говорят о качестве биоматериала, от которого зависит исход процедуры.

Качество эмбрионов и их классы тесно связаны друг с другом. Существует 4 класса:

  • класс А – полностью отсутствую безъядерные фрагменты;
  • класс В–не более 20% безъядерных фрагментов от общего объема;
  • класс С – содержание ануклеарных фрагментов от 21% до 50%;
  • класс D – содержится более 50% безъядерных фрагментов, категория не используется для дальнейшего проведения процедуры.

Фрагментация эмбриона при ЭКО чаще всего говорит о каких-либо генетических нарушениях со стороны женских или мужских репродуктивных органах.

Классы

На сегодняшний день оценка качества зародышей происходит по количеству клеток, а также степени фрагментации.Если в карте ставится: эмбрионы 8а — это значит, что зигота содержит 8 клеток, а фрагментация полностью отсутствует. Также учитывается равномерность дробления, наличие вакуолей и отсутствие ядерных бластомеров.

Эмбрион bl1 – это маленькая бластоциста, качество которой на данном этапе оценить очень трудно. Имплантация дает положительные результаты в том случае, если хорошо развита внутренняя клеточная масса бластоцисты и трофобласт.

Эмбрион 4аа класса – это хорошее качество бластоцисты, имплантируется с вероятностью более 70%. Первая проверка качества зародыша происходит через 48 часов после изъятия яйцеклетки для проведения ЭКО. Оплодотворение яйцеклеток и качество зиготы оцениваются в первый день после подсадки.

Таблица — Качество эмбрионов для переноса

Зародыши выбирают по следующим критериям:

  1. степень фрагментации;
  2. качество;
  3. однородность и форма клетки;
  4. время деление клетки;
  5. отсутствие цитоплазмы.

Для проведения ЭКО оставляют только самые сильные зародыши для проведения.

Протокол культивирования

Протокол культивирования эмбрионов по дням проводится для того, чтобы выбрать более сильные зародыши.

Развитие зародышей происходит следующим образом:

  • 1 день – проводится пункция;
  • 2 день – клетки начинают делиться, при нормальном развитии должно быть от 2 до 4 бластомер;
  • 3 день – здоровые клетки продолжают делиться, бластомеров уже от 6 до 8;
  • 4 день – клетки разделяются на 10-16 бластомеров;
  • 5-6 день – бластомеры превращаются в бластоцисты, что увеличивает шансы имплантации.

Самые лучшие среды для культивирования эмбрионов считается та, которая близка к среде жидкости, находящейся в маточных трубах. В каждом отдельном случае проводится индивидуальное культивирование эмбриона в естественном цикле, так как у каждой женщины сроки овуляционного цикла свои.

Расшифровка протокола производится исключительно врачом-эмбриологом на основании формы, цвета, размера бластоцисты. Лаборант ежедневно проводит исследование каждого зародыша и вносит отметку в карту. Такой подход помогает выбрать самый подходящий образец для подсадки в маточные трубы будущей матери.

Противопоказания

ЭКО не имеет противопоказаний, однако, при внутриматочном введении эмбриона существуют некоторые факторы, при которых данную процедуру проводить не рекомендуется.

К противопоказаниям относятся:

  • опухоли различной этиологии;
  • фиброма;
  • нарушения функций репродуктивных органов;
  • отсутствие матки;
  • инфекционные заболевания;
  • воспалительные процессы;
  • обострения хронических заболеваний.

Если ЭКО несколько раз подряд не дает положительных результатов, это значит, что есть проблемы с яйцеклетками или сперматозоидами. В таком случае врачи советуют выбрать другой получения биоматериала, например, ИКСИ. Процедура подразумевает введение сперматозоида в цитоплазму ооцита.

Какой бы метод оплодотворения не использовался, часть материала останется непригодной. Одни зародыши быстро погибают, прекращая свой рост, другие имеют неподходящий генотип. По статистике в лучшем случае пригодны лишь 68% образцов. Культивирование помогает увеличить шанс прикрепления зародыша к матке. При хорошей подготовке приживается до 95% бластоцист.

Источник: https://ekoclinic.ru/procedura/kultivirovanie-embrionov/

Поделиться:

Нет комментариев

motheringcare.ru

Оценка качества эмбрионов в программах ЭКО

Работать с клетками микроскопических размеров крайне сложно. Для этого нужно иметь высокую степень профессионализма и дорогостоящее высокотехнологичное оборудование.

Только специалист с достаточным опытом практической деятельности может оценить жизнеспособность эмбрионов и принять решение об эмбриотрансфере.

Эмбриональное развитие – сложный процесс. Оплодотворенная яйцеклетка делится, достигая стадии бластоцисты на 5-й день развития. Если до этой стадии зародыш представлял собой клеточную массу, то бластоциста приобретает организованное строение: трофобласт (внешний слой), задача которого «зацепиться» за эпителий эндометрия в матке, а далее участвовать в формировании плаценты и эмбриобраст (внутренний зародышевый узел).

Если из всех эмбрионов, используемых в программе ЭКО, как минимум 40% достигнет стадии бластоцисты высокого качества, то эмбриональный этап считается успешно проведенным, а у процедуры имеются хорошие шансы на удачное завершение.

Для эмбриотрансфера используют не больше 2-х бластоцист, остальные здоровые эмбрионы можно подвергнуть криоконсервации. Если первая попытка искусственного оплодотворения окажется неудачной, то можно использовать витрифицированный материал, качество которого не страдает от замораживания и размораживания, а женщина избежит такого сложного этапа ЭКО, как гормональная стимуляция.

Каждому этапу развития эмбриона соответствует своя система оценки качества и способ записи этой оценки. И для того чтобы понимать обозначения вроде «8с» необходимо хотя бы немного разобраться в содержании этих этапов и сопутствующих терминах.

День первый

На первом этапе эмбриолог оценивает признаки оплодотворения после проведенной процедуры ЭКО, ИКСИ, ИМСИ или PICSI. На этом этапе в эмбрионе оценивают наличие, количество, симметричность, внутреннее строение и внешний вид пронуклеусов.

Пронуклеусы — это ядра мужской и женской половых клеток еще не слившихся и несущих одинарный набор хромосом. По их количеству и внешнему виду оценивают жизнеспособность эмбриона и перспективы возникновения патологий.

В норме их должно быть два, они должны иметь относительно равные размеры, находиться рядом и иметь внутри «ядрышки» — пронуклеоли тоже в определенном количестве и расположенные определенным образом.

На этом этапе может формироваться множество патологий, например, при присутствии только одного пронуклеуса оплодотворение и не сможет произойти, ведь именно это образование и есть носитель генетического материала, а без участия противоположного пола размножаться мы еще не научились.

Пронуклеусов может оказаться и три. Такие эмбрионы часто несут аномальный, тройной набор хромосом и нежизнеспособны. Обычно они погибают до имплантации (прикрепления к стенке матки) или приводят к замершей беременности. Такие эмбрионы отбраковываются и не используются в программах ЭКО.

День второй

Вторые сутки знаменуются соединением ядер женской гаметы и мужской, а также процессом дробления зиготы, которая на этой стадии становится эмбрионом. Численность бластомеров (эмбриональных клеток) – 2–4, но их объем не увеличивается.

Дробление эмбрионов оценивается специалистом по таким критериям:

  • количество эмбриональных клеток;
  • форма, строение, размеры;
  • симметричность деления;
  • скорость дробления;
  • число ядер в бластомерах. В норме бластомеры одноядерные, при патологиях возникает мультинуклеация (более одного ядра), что, скорее всего, свидетельствует о хромосомном нарушении у эмбриона;
  • отклонения в цитоплазме (содержимое клетки);
  • наличие участков цитоплазмы, неимеющих ядер (фрагментация). Чем выше степень фрагментации, тем больше рисков, что эмбрион далее будет развиваться. На сегодняшний день до конца непонятно, почему происходит фрагментация, которая встречается в программах ЭКО довольно часто: является ли это следствием стимуляции или это характерная особенность эмбрионального развития.

Максимальной имплантационной способностью обладают эмбрионы с регулярной формой бластомеров, отсутствием фрагментации, нормальной скоростью деления.

Уровень фрагментации и численность бластомеров классифицируется по типам следующим образом:

  • А – высококачественный эмбрион без фрагментированных бластомеров;
  • В – среднекачественный эмбрион, фрагментация составляет менее 20%;
  • С – удовлетворительное качество эмбриона, фрагментация составляет 21–50%.

Самый качественный эмбрион — 4А, где 4 — количество бластомеров, А — отсутствие фрагментации.

День третий

Продолжается дробление эмбриона, у которого насчитывается от 4 до 9 бластомеров. В начале третьего дня развития запускается собственная генетическая программа, которая в некоторых случаях содержит «опечатки». До этого эмбрион для своего роста «пользуется» веществами, накопленными яйцеклеткой во время ее созревания.

Если эмбрион имеет мутации в программе («блок развития»), то далее он не развивается. Это происходит примерно в 20% случаях. Причиной «блока развития» может быть низкокачественная семенная жидкость или яйцеклетка. Изначальное неудовлетворительное развитие эмбриона свидетельствует о проблемах с яйцеклеткой, если эмбрион «страдает» с третьих суток культивирования, то сперма была ненадлежащего качества.

«Блок развития» – это так называемый естественный отбор, эволюционный спасительный механизм, который останавливает развитие некачественных эмбрионов. Как в дальнейшем будет развиваться и расти эмбрион зависит от сформированного генома и своевременности начала его функционирования.

День четвертый

К этому сроку эмбрион содержит до восьми бластомер. Клетки контактируют значительно активнее, поверхность у эмбриона немного сглаживается. Культивирование эмбриона третьи сутки характеризуется началом такого процесса, как компактизация, когда границы эмбриональных клеток различить невозможно. Компактизация бывает частичная или полная. Если этот процесс произошел на второй день, то возможно эмбрион развивается неправильно, с отклонениями, что отображается в эмбриологическом протоколе. Готовится переход эмбриона в бластоцисту.

В моруле (трехдневный эмбрион) содержится до 16 бластомеров. При естественном зачатии на этом сроке эмбрион транспортируется из фаллопиевых труб в матку. По окончании четвертых суток происходит кавитация, когда внутри эмбриона образуется пустота.

В процессе эмбрионального роста за пределы зародышевой оболочки выходит определенное количество клеток. Эти клетки при необходимости генетического исследования забирают на анализ.

Диагностику проводит эмбриолог на 5–6 сутки, прокалывая зародышевую оболочку. Биопсия абсолютно безопасна для эмбриона и не вредит его развитию. До получения диагностических данных эмбрионы криоконсервируют.

Результаты исследования напрямую повлияют на дальнейшую «судьбу» эмбриона, характеристики которого никак не меняются после размораживания. Современные безопасные технологии замораживания биоматериала позволили широко внедрить в различные программы ВРТ генетическую диагностику.

На четвертый день оценка эмбриона малоинформативна, но его можно оценить по численности компактизированных клеток. Чем больше таких клеток, тем вероятнее эмбрион станет бластоцистой.

Оценивание компактизации происходит по классам:

  • первый – компактизировано меньше 50% клеток;
  • второй – примерно 50%;
  • третий – 75%;
  • четвертый – 100%.

Не во всех лабораториях происходит оценка по такому критерию.

День пятый

На данном этапе, включающем период с конца четвертого до начала шестого дня, морула, полость которой составляет половину своего объема, становится бластоцистой, состоящей из двух типов клеток:

  1. Трофобласт – наружная оболочка, состоящая из однослойного эпителия, расположенная вокруг внутренней полости. Задача трофэктодермы – регуляция и контроль над имплантацией эмбриона в эндометрий, развитие плаценты и внеэмбриональных оболочек.
  2. Эмбриобласт (внутриклеточная масса) – масса служит основой для образования тканей и органов будущего ребенка.

Ооцит окружен блестящей оболочкой плотной консистенции (Zona pellucida), выполняющей две функции: она препятствует проникновению в яйцеклетку более одного спермия и удерживает вместе бластомеры.

По мере роста внутриэмбриональная полость расширяется, приводя к разрыву оболочки, в результате чего происходит выход бластоцисты или «хэтчинг» (вылупление).

На этом этапе оценка эмбриона происходит по таким критериям:

  • объем внутренней полости;
  • степень выхода за оболочку;
  • плотность трофэктодермы;
  • количество эмбриобластов.

Качество обозначается цифрами (1–5), количество — буквами (А-С).

На пятый день бластоцисты переносят в матку или замораживают.

Бластоцисты оценивают по степени зрелости (бластуляция):

  • первая степень – ранняя бластоциста с внутренней полостью меньше 50% объема эмбриона;
  • вторая – полость больше 50% объема;
  • третья – полость занимает 100% объема эмбриона;
  • четвертая – расширенная бластоциста с полостью становится больше оболочки (Zona pellucida), которая истончается;
  • пятая – проникновение трофобласта через оболочку;
  • шестая – бластоциста покинула Zona pellucida.

Оценка эмбриобласта:

Важнейший критерий внутриклеточной массы (ВКМ) – плотность, сгруппированность. Эмбрион считается более качественным, если отмечается высокая плотность ВКМ.

  • А – большое количество плотно сгруппированной внутриклеточной массы.
  • В – количество клеток и плотность средняя.
  • С – количество ВКМ незначительно.

Критерии трофэктодермы – количество и маленький размер:

  • А – многочисленные клетки трофэктодермы.
  • В – незначительная численность клеток.
  • С – большого размера клетки в небольшом количестве.

Степень приживаемости эмбрионов в полости матки оценивают спустя две недели по исследованию крови на ХГЧ. Более достоверная информация будет получена с помощью УЗ-диагностики через три недели. Вероятность наступления беременности зависит во многом от качества имплантированных эмбрионов.

Морфологические данные, используемые для оценивания эмбрионов, являются необходимыми и основными, но этого не всегда достаточно. Иногда при переносе высококачественных эмбрионов они не имплантируются. В других случаях при переносе эмбрионов невысокого качества наступает беременность. Поэтому эмбриологи используют дополнительные варианты оценивания, позволяющие спрогнозировать имплантацию.

Развитие эмбрионов является сложным трудоемким процессом, в котором нужно учитывать массу тонких нюансов, что под силу только высокопрофессиональным специалистам.

Если в ходе проведения программы ЭКО удалось довести 40% эмбрионов до этапа бластоцисты отличного качества, то программа считается успешной.

В этом плане криотехнологии, применяемые в протоколах ЭКО, неоценимы, поскольку есть возможность не только перенести в матку высококачественные эмбрионы, но и заморозить оставшиеся. Это преимущество позволяет использовать криозамороженный биоматериал при следующем переносе, минуя несколько небезопасных для здоровья и дорогостоящих этапов.

altravita-ivf.ru

Классы эмбрионов при ЭКО

В России более 20% населения страдают бесплодием. Экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) — это вспомогательные технологии, которые помогают семейным парам обрести счастье материнства и отцовства.

Первый ребенок из пробирки появился на свет 35 лет назад. На сегодняшний день таких детей на Земле около 4,5 миллионов.

Часто люди, решившиеся зачать малыша с помощью репродуктивных технологий, сталкиваются с таким понятием, как качество эмбрионов и их классы.

Это совокупность параметров, которые помогают эмбриологу выбрать самые генетически полноценные и жизнеспособные эмбрионы, что позволяет обеспечить появление на свет долгожданного ребенка и избежать многоплодия.

Классы Эмбрионов ЭКО перед подсадкой

При подготовке к процедуре ЭКО проводится гормональная стимуляция яичников, которое вызывает одновременное созревание нескольких яйцеклеток.

Суть методики экстракорпорального оплодотворения заключается в заборе женских зрелых яйцеклеток, оплодотворении их семенной жидкостью мужа, выращивании получившихся зародышей в лабораторных условиях до определенной стадии развития и подсаживании в полость матки будущей матери.

Одновременно оплодотворяются несколько яйцеклеток и получается несколько эмбрионов.

Все дело в том, что когда он подсаживается женщине, существует большая вероятность его отторжения, поэтому одновременно выращивают несколько.

Самым важным в цепочке репродуктивной технологии является эмбриологический этап, от того, каким будет качество эмбрионов при ЭКО зависит вероятность наступления полноценной беременности.

Культивация Эмбрионов

Выращивание эмбрионов происходит в специальных инкубаторах, где автоматически поддерживается определенная влажность, газовый состав, температура.

Культивация эмбрионов происходит в особой среде, которая по своим основным параметрам является аналогом внутренней среды полости матки.

Женщине проводят гормональную терапию, целью которой является стимулирование функции яичников. Процедура экстракорпорального оплодотворения начинается с трансвагинальной пункции, во время которой репродуктолог берет забор фолликулярной жидкости, содержащей женские яйцеклетки.

Выделенные яйцеклетки культивируются до момента оплодотворения в лабораторных условиях. Параллельно с выделением яйцеклеток происходит забор генетического материала мужа. Сперма обрабатывается с целью выделения самых жизнеспособных и активных сперматозоидов.

Затем оплодотворяют женскую яйцеклетку полученным концентратом семенной жидкости.

Культивация Эмбрионов при ЭКО по дням

Развитие эмбриона при ЭКО продолжается около пяти суток с момента пункции и состоит из следующих этапов:

  1. Результатом слияния яйцеклетки и сперматозоида является образование зиготы. Этот клеточный цикл длится 24 часа. Затем происходит интенсивное деление клеток зиготы, в результате деления образуются две равноценные клетки, которые называются бластомерами. Из бластомеров при последующем делении образуются все клетки человеческого тела;
  2. На второй день деление эмбриона достигает стадии восьми бластомеров. На этой стадии бластомеры приобретают специализацию. Это самый уязвимый этап для зародышей, на котором может возникнуть блок развития и эмбрион полностью прекращает деление;
  3. На третий день количество бластомеров достигает 12-14. Межклеточные связи уплотняются, эмбрион выглядит как шарик с идеально гладкими контурами. Эта стадия развития эмбриона носит название морула. Именно на этой стадии при естественном развитии событий эмбрион спускается в матку. Во многих клиниках на этом этапе развития эмбрион считают полностью созревшим для имплантации;
  4. При достижении стадии шестнадцати бластомеров, которая наступает на четвертые сутки. И носит название бластоциста. Начинается процесс кетчинга, который можно сравнить с выклевом птенчика из яйца. Эмбрион выходит из блестящей оболочки и становится способным к успешному переносу в полость матки. Культивирование эмбриона до стадии бластоцисты позволяет сделать процедуру ЭКО более физиологичной.

Ежедневно репродуктолог фиксирует качество эмбрионов, все параметры зародышей описываются в специальном журнале — протоколе. Подсадка эмбрионов происходит на 3-5 сутки после пункции.

Из всех развившихся эмбрионов выбирают те, приживление которых наиболее вероятно. Критерием отбора служат морфологические признаки. К ним относятся:

  • Степень фрагментации. Этот параметр определяет соотношение нормальных бластомеров к клеткам, не имеющим ядра;
  • Количество клеток эмбриона должно точно соответствовать дню развития;
  • Клетки должны быть одинакового размера и иметь правильную форму.
  • Деление должно происходить в определенное время и быть равномерным;
  • В эмбрионе хорошего и отличного качества должны отсутствовать включения. Присутствие включений цитоплазмы — плохой признак.

На основании этих признаков разделяют классы эмбрионов ЭКО.

Классы эмбрионов ЭКО

В большинстве клиник имплантируют 3-5 дневные эмбрионы. В связи с этим разработана классификация именно для этих стадий развития.

Залогом успешности процедуры ЭКО является выбор наиболее генетически здоровых и жизнеспособных эмбрионов.

Репродуктолог ежедневно следит за их развитием с момента оплодотворения и контролирует их качество.

Классы Эмбрионов ЭКО

Классификация трехдневных эмбрионов

Для имплантации используют эмбрионы отличного и хорошего качества. Для обозначения класса и качества используют специальную маркировку. Маркировка состоит из комбинации букв и цифр, где буква обозначает процент фрагментации, а цифра — количество клеток эмбриона.

  1. Отличного качества А. Эмбрионы этого класса отличаются высокой скоростью деления, правильной сферической формой бластомеров, максимальной способностью к имплантации;
  2. Хорошего качества B. Характеризуются неровной формой бластомеров, умеренной фрагментацией, высокой способностью к имплантации;
  3. Удовлетворительного качества С. Фрагментация таких эмбрионов составляет от 10 до 50%;
  4. Плохого качества D. Эмбрионы этого класса имеют процент фрагментации более 50 % и отбраковываются.

Например, запись 4А расшифровывается как четырехклеточный эмбрион отличного качества без фрагментации.

В полость матки единовременно подсаживают от одного до трех эмбрионов, рассчитывая, что хоть один из них приживется.

Оставшиеся хорошего и отличного качества замораживают, чтобы использовать в следующих циклах ЭКО. Так можно избежать излишней гормональной терапии.

Классификация пятидневных эмбрионов

Качество пятидневных эмбрионов оценивается по размеру бластоцисты, качеству внутриклеточной массы, качеству трофоэктодермы.

Класс эмбрионов на стадии бластоцисты маркируется комбинацией цифр и двойным буквенным обозначением:

  • Качество эмбрионов на стадии бластоцисты оценивается по степени экспансии (размеру бластоцисты) и обозначается цифрами от 1 до 6. Где 1 — это ранняя бластоциста, 2 — средняя, 3 — экспандированная, 4 — бластоциста с начавшимся кетчингом, 5 — бластоциста в хетчинге, 6 — бластоциста с завершившимся хетчингом;
  • Плотность и отсутствие видимых дефектов обозначается буквами A, B, C, D. Где А — это наиболее качественный, плотный эмбрион. А эмбрионы, маркированные буквой D, являются дефектными и отбраковываются;
  • Расположение клеток, наличие или отсутствие включений также маркируется буквами A, B, C и D. Где А — эмбрион с плотными межклеточными связями и отсутствием цитоплазматических включений, а D — дегенеративный зародыш.

Например, эмбрион 5АВ — хороший эмбрион в стадии хетчинга с незначительными дефектами.

Какие факторы влияют на качество эмбриона при ЭКО

Прежде всего, качество эмбрионов зависит от показателей генетического материала родителей.

В свою очередь качество яйцеклеток и семенной жидкости зависит от многих факторов. Негативно влияют на активность половых клеток следующие условия:

  1. Проживание в крупных городах с неблагоприятной экологической обстановкой;
  2. Вредные привычки: курение и употребление алкогольных напитков;
  3. Лишний вес обоих супругов;
  4. Соблюдение вегетарианской диеты;
  5. Постоянный стресс;
  6. Гормональная терапия.

Видео: Развитие Эмбриона от оплодотворения до подсадки

Заключение

Минимизировать неблагоприятное влияние этих факторов на качество эмбрионов поможет тщательная подготовка к репродуктивной процедуре. За два месяца до планируемого забора материала мужчина и женщина должны придерживаться здорового образа жизни. Правильно питаться, отказаться от курения и алкоголя, избегать посещения сауны, принимать витаминные добавки.

К немаловажным факторам, влияющим на то, приживется ли эмбрион при ЭКО относится профессионализм врача эмбриолога и оснащенность клиники современным медицинским оборудованием и препаратами.

detieco.ru

Оценка качества ооцитов и эмбрионов

Все пациенты интересуются качеством полученных  клеток, а в дальнейшем и качеством эмбрионов. Однако данный вопрос многофакторный и не имеет однозначного ответа. Начнем с начала. Первый вопрос, который задают пациенты, когда к ним в палату после процедуры забора ооцитов приходит эмбриолог, звучит всегда одинаково: «А клетки у меня хорошие?». Хочется сразу заметить, что на этот вопрос очень сложно ответить на данном этапе программы ВРТ. Первичная оценка ооцита основана на непосредственном визуальном анализе морфологии ооцит-кумулюсного комплекса. При получении ооцитов эмбриолог смотрит на клетки через бинокулярный микроском с незначительным уровнем увеличения. Выглядит это вот так:

В данной ситуации оценить детально качество ооцитов не представляется возможным. Эмбриолог может только делать предположения. Поэтому оценка ооцитов на этапе проведения трансвагинальной пункции яичников не проводится.

После забора ооцитов эмбриолог определяется с тем, каким методом проводить оплодотворение полученных клеток.

Метод оплодотворения выбирается на основании показателей мужского материала. Если показатели спермограммы снижены – выбирается метод ICSI. Суть его заключается в том, что эмбриолог очищает ооциты от клеток кумулюса и с помощью специальных инструментов, работая на специальном микроскопе, вводит морофологически хороший, активно-подвижный сперматозоид внутрь клетки. Перед тем как ввести сперматозоид в клетку, его обездвиживают. Данный метод оплодотворения предлагается также парам с бесплодием неясного генеза и пациентам, планирующим проведение преимлантационной генетической диагностики. Помимого этого, ИКСИ может быть проведено по желанию пациента.

При хороших показателях спермограммы проводится оплодотворение методом ЭКО. В чашке со специальной средой соединяют сперматозоиды и ооциты, а оплодотворение происходит естественным способом.

Итак, поговорим более подробно о зрелости и качестве ооцита.

Созревание ооцита до состояния, когда он способен к оплодотворению, происходит в процессе стимуляции суперовуляции, проводимой врачом гинекологом-репродуктологом. Не все ооциты в процессе стимуляции достигают зрелости.

  • Способны оплодотворятся только ооциты, находящиеся в стадии метафазы 2 процесса мейоза. Их обозначают как М2.

Зрелый ооцит выглядит так

  • Ооциты не достигшие зрелости имеют отличия от ооцита М2, которые эмбриолог способен увидеть только при выполнении оплодотворения методом ICSI. Незрелые ооциты имеют 2 вида: это клетка находящаяся в метафазе 1 мейоза (М1) и так называемый герминальный везикул (GV) ооциты в профазе I деления мейоза, определяемые по наличию зародышевого пузырька или ядерной оболочки в цитоплазме.

М1  

GV

 При оплодотворении методом ЭКО такую оценку не проводят. Возможность оценить клетки в данной ситуации возникает только утром следующего дня, а в это время не всегда возможно понять, какими клетки были в момент пункции, т.к. они имеют возможность пройти процесс дозревания в условиях инкубатора.

Что такое качество ооцита

Качество ооцита характеризует внешний вид цитоплазмы, вителлинового слоя, полярного тельца. Гомогенная цитоплазма с однородным цветом и отсутствием гранулярности характеризует хорошее качество ооцита. Вакуоли, темная окраска, всевозможные включения, деформация или гранулярность расцениваются при морфологической оценке качества ооцита как негативные признаки.

Ооцит плохого качества, с гранулированной цитоплазмой и вакуолью большого размера в центре. 

 

Оценка оплодотворения

Оценка оплодотворения проводится утром следующего за пункцией дня. Этот день считается 1-м днем эмбрионального развития.

Возможность понять, произошло ли оплодотворение клетки, появляется через 18 часов после оплодотвоерния и характеризуется формированием пронуклеусов. Эмбрион первых суток развития называется зиготой.

 

На этот день эмбриолог оценивает «правильность» оплодотворения. Нормально оплодотворившийся ооцит содержит 2 пронуклеуса. Все остальные варианты считаются отклонением. 

Триплоидный эмбрион (3pn)

Аномально оплодотворившиеся эмбрионы исключаются из культивирования.

Оценка качества эмбрионов 2-3 дня развития

Начиная со вторых суток эмбрионального развития начинается фаза дробления.

 Дробление - это синхронное быстрое деление эмбриона на равные крупные клетки. Эти клетки называются бластомерами. Оценка качества эмбриона производится по равномерности бластомеров. Чем более равномерные бластомеры содержит эмбрион, тем лучшим считается его качество. Оценку эмбрионов данных суток развития осуществляют по количеству бластомеров (обозначается цифрой) и по дополнительным критериям, таким как равномерность бластомеров и наличие фрагментации (оценивается латинскими буквами a,b,c,d и их комбинацией).

Эмбрион хорошего качества выглядит так.

  

4-е сутки эмбрионального развития

На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 16-18 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются, и поверхность эмбриона сглаживается. Этот процесс называется компактизацией. Важно понимать, что до 3-х суток дробление эмбриона происходит механически, каждая клетка делится пополам, черпая энергию из запасов  ооцита. Начиная с 4 суток эмбрионального развития начинается дифференциация клеток эмбриона, часть из них сформируют зародыш, остальные будут обеспечивать возможность имплантации и формирования плаценты.

На данном этапе эмбрионы наиболее чувствительны к отрицательным воздействиям.

Качество бластоцисты, которая сформируется из морулы, оценить практически невозможно.

Оценка качества морулы проводится по характеристикам компактизации:

  • А - эмбрион полностью компактизован. Клеточные мембраны видны нечетко.

  • В - компактизовано более 75% бластомеров. Эмбрион сохраняет сферичную форму и гладкую поверхность.

  • С - частичная компактизация (около 50% бластомеров).

  • D - компактизация менее 50% бластомеров. Различимы фрагменты и некомпактизовавшиеся бластомеры. 

Морулы отличного качества

   

Морула плохого качества

 

Далее внутри морулы начинает формироваться полость. Когда эта полость достигает достигает 20% от ее объема, эмбрион называется бластоцистой. В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4-х по середину 6-х суток развития, но чаще это происходит на 5-е сутки. В редких случаях возможно формирование бластоцисты к 7-м суткам эмбрионального развития.

 Бластоциста состоит из двух популяций клеток, таких как: трофэктодерма (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотное образование из клеток внутри бластоцисты). Из трофэктодермы сформируется в дальнейшем плацента и все зародошевые оболочки. Из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка. На данном этапе развития эмбрион оценивают по 3 критериям:по размеру полости, качеству трофэктодермы и качеству внутриклеточной массы. 

Размер полости оценивают цифрой от 1-ого до 4-х. Внутриклеточную массу и трофэктодерму оценивают буквами от А до С. Первая буква в оценке качества будет относится к внутриклеточной массе, вторая – к качеству трофэктодермы. Если бластоциста успела совершить «хетчинг» (разрыв оболочки, окружающий эмбрион), такой бастоцисте присваивается цифра 5. Если же бластоциста успела полностью выбраться из оболочки после хетчинга, такую бластоцисту обозначат цифрой 6. Размер полости имеет меньшее значение в определении качества эмбриона, чем буквенная классификация. Ввиду того, что эмбрионы имеют индивидуальные особенности, они могут развиваться неравномерно. Любой размер полости определяется как вариант нормы. Буквенные обозначения следует понимать так: наивысшее качество оценивается буквой А, наихудший вариант развития внутриклеточной массы и трофэктодермы обозначается буквой С.

Важно понимать, что критерии оценки эмбрионов носят субъективный характер. Даже эмбрионы, оцененные по классификации как эбмрионы среднего и ниже среднего качества, могут дать полноценную беременность. 

Бластоцисты хорошего качества

3АА

4АА

5АА

 

5АА

6АА

Бластоцисты среднего качества

1АВ

 

 2ВВ

Бластоцисты плохого качества

2ВС

3ВС

 

  2СС

nova-clinic.ru

Процесс оплодотворение яйцеклетки у женщин по дням: сроки, признаки.

Центральным звеном клиники ЭКО является эмбриологическая лаборатория. Для каждой попытки ЭКО заводится «Эмбриологический протокол», в котором отражается судьба каждого эмбриона от момента получения ооцитов и до момента переноса или замораживания.

Сразу после получения ооцитов и сперматозоидов производится их морфологическая оценка. По результатам анализа эякулята (спермограмме) принимают решение о способе оплодотворения – ЭКО или ИКСИ.

Оценка ооцитов

Оплодо- творение

Стадия развития эмбрионов

Вид ВРТ (ЭКО/ИКСИ)

Комментарий

День после пункции

0

1

2

3

4

5

Итог

Дата

07.03

08.03

09.03

10.03

11.03

12.03

13.03

Эмбриолог

Калиниа

Сергеев

Калиниа

Калиниа

Калиниа

Сергеев

1

Калинина И.И.

MII

2 pN

4 AB

6 AB

Cryo (Bl Ab 3)

Cryo

ИКСИ

2

Калинина И.И.

MII

2 pN

4 AB

6 BA

Cryo (Bl Bb 3)

Cryo

ИКСИ

3

Калинина И.И.

MII

2 pN

4 AB

8 AB

Cryo (Bl Bb 2)

Cryo

ИКСИ

4

Калинина И.И.

MII

2 pN

4 AB

8 AB

Cryo (Bl Ab 2)

Cryo

ИКСИ

5

Калинина И.И.

0-1

2 pN

4 AB

7 AB

ET (Bl Aа 3)

ET

ЭКО

6

Калинина И.И.

0-1

1 pN

4 AB

8 AB

Cryo (Bl Bb 3)

Cryo

ЭКО

7

Калинина И.И.

0-1

1 pN

4 AB

8 AB

Cryo (Bl Bс 2)

Cryo

ЭКО

8

Калинина И.И.

0-1

2 pN

4 AB

8 AB

ET (Bl Аb 4)

ET

ЭКО

9

Калинина И.И.

0-1

2 pN

6 AB

8 B

8B

ЭКО

Описание: День 0. Непосредственно после пункции оценивают зрелость полученных ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК). ОКК с прозрачным кумулюсом как правило содержит зрелый ооцит и получает оценку «1-1».При пункции возможно получение зрелых, незрелых, а также дегенеративных и разрушенных яйцеклеток. Точная оценка состояния ооцита возможна только после его очистки перед проведением ИКСИ.

В зрелых, готовых к оплодотворению ооцитах определяется первое полярное тельце. В эмбриологическом протоколе зрелый ооцит обозначают MII.

Если процесс созревания ооцита в фолликуле нарушен или неправильно введен триггер (ХГ), то существует большая вероятность получения незрелых клеток, обозначаемых – MI и GV (Рис.1). Возможна и полная дегенерация ооцита (Deg).

Рис 1. Ооциты, полученные при пункции яичников после удаления кумулюса (денюдации). А - MII, Б – MI, В – GV. Pb – полярное тельце, ZP – блестящая оболочка

Через 18-20 часов после добавления сперматозоидов или ИКСИ (1-е сутки) при нормальном оплодотворении образуются два пронуклеуса. Это предшественники ядер будущих клеток-бластомеров, на которые начинает делиться оплодотворенная яйцеклетка. При правильном оплодотворении оба пронуклеуса четко различимы. В этом случае им присваивают оценку 2pN. Если пронуклеусов не видно, что обычно связано с отсутствием оплодотворения, в протокол записывается 0pN. При неправильном оплодотворении возможно появление нескольких пронуклеусов, что отражается в записи, например 3pN, 6pN и т.д.(Рис2). «Неправильно» оплодотворенные ооциты не пригодны для дальнейшей работы и утилизируются.

Рис 2. Первый день развития in vitro – формирование зиготы и образование пронуклеусов.                          А – 2pN (нормальное оплодотворение) – два пронуклеуса     Б – 3pN (аномальное оплодотворение) – больше, чем два пронуклеуса.

Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение пяти-шести дней. Оценка качества эмбрионов проводится через 40-42 часа (2 сутки), 72-74 часа (3 сутки) и 120 часов (5 сутки) после оплодотворения. Дробление эмбриона должно быть симметричным (получаются бластомеры одинакового размера) и равномерным (все бластомеры претерпевают деление). Для наглядности эмбриологи используют численно – буквенную систему оценки качества, где цифра означает количество бластомеров, а буква их качество. Для обозначения эмбриона хорошего качества используется буквенный индекс «А», среднего «B», низкого «С». Возможны и промежуточные варианты, например АВ, ВА, ВС, СВ, когда сложно дать однозначную оценку (Рис3).

2-й день (4А)                          3-й день (8А)                 4-й день (comp)

Рис 3. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro и компактная морула на 4-й день развития. Представлены эмбрионы отличного (А) качества. B – бластомер ZP – блестящая оболочка.

Для второго дня культивирования перспективными считаются эмбрионы с четырьмя бластомерами - 4А, 4АВ, 4В. Для третьего - восьмиклеточные (8А, 8АВ, 8В). Эмбрионы плохого качества (ВС, СВ, С) как правило не переносят, оставляют до пятого дня и при формировании нормальной бластоцисты замораживают или переносят в матку. В случае неравномерного дробления (наличия бластомеров разной величины) потенциал эмбриона к имплантации снижен, и обозначается это приставкой «un», например 3Вun. Наличие фрагментов цитоплазмы обозначают «fr», например 8ВСfr (Рис.4). Оценивается и наличие вакуолей. При их визуализации ставится отметка «vac». В норме каждый бластомер несет одно ядро, если хотя бы в одном бластомере визуализируется больше одного ядра, это называется мультинуклеацией (mN) и указывает на значительную вероятность хромосомной патологии данного эмбриона.

Рис 4. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro. Представлены эмбрионы хорошего (ВА, В) и удовлетворительного (ВС) качества. Во втором ряду эмбрионы с неравномерным дроблением (3Bun и 4BAun).

К концу третьих и на четвертые сутки культивирования эмбрион начинает компактизацию (границы его клеток становятся неразличимы) и готовится к образованию бластоцисты. Его клетки могут быть частично (p.comp) или полностью компактизованы (comp) (Рис.5). Обычно оценка эмбрионов на четвертые сутки не проводится ввиду малой информативности данной стадии развития. Однако наличие компактизации на вторые сутки может свидетельствовать об аномальном развитии и обязательно должна отражаться в эмбриологическом протоколе.

Рис 5. Стадия компактизации 4-е сутки культивирования A – p.comp Б - comp

На пятые сутки, примерно через 120 часов после оплодотворения эмбрион образует бластоцисту (Bl) (Рис.6). Оценка качества бластоцист подразумевает ее размер, который отражается цифрами от 1 до 5; состояние внутренней клеточной массы (ВКМ) (от «A» до «С») и окружающих ее клеток – трофобласта (от «а» до «с»). Лучшими для переноса будут бластоцисты размера от 3 до 5, имеющие многоклеточную ВКМ и трофобласт – Bl4Aa, Bl4Ab. Бластоцисты среднего качества обозначаются как – Bl2Bb, Bl3Bb, а плохого – BlCc.

Рис 6. Бластоцисты на пятый день развития in vitro. e.bl – ранняя бластоциста, Bl3Ab – экспандированная бластоциста, Bl5Ab – бластоциста перед хетчингом, ВКМ – внутренняя клеточная масса.

Дальнейшее развитие эмбриона происходит уже в матке после имплантации. Для успешной имплантации бластоцисте необходимо выйти из окружающей ее блестящей оболочки. Данный процесс называется вылупление, или хетчинг. В случае, когда эмбриолог отмечает изменения блестящей оболочки и после криоконсервации эмбрионов процесс самостоятельного вылупления бластоцисты может быть затруднен и его возможно облегчить применяя вспомогательный хетчинг. В нашем центре мы используем наиболее эффективный лазерный вспомогательный хетчинг.

Самая высокая частота оплодотворения получена при переносе эмбрионов на стадии бластоцисты. Так, в нашем центре она составляет 53%. В то время, как при переносе на стадии 6-8 бластомеров – 47%.

Замораживание и ПГД также лучше всего выполнять на стадии бластоцисты. Однако, не все эмбрионы доходят до бластоцисты. Поэтому общепринятым считается следующий подход: если на 5 день культивирования имеется меньше 5 эмбрионов, как минимум один переносят, остальные оставляют до 5 дня. Из достигших бластоцисты еще один может быть перенесен (двойной перенос), остальные замораживают. Если на 3 день эмбрионов 5 и больше, их не переносят и оставляют культивировать до 5 дня. На 5 день одну, реже две бластоцисты переносят, остальные замораживают.

В заключение следует отметить, что описываемые морфологические критерии оценки качества эмбрионов являются основными, необходимыми, но не всегда достаточными для выбора эмбриона для переноса. Так, нередко после переноса эмбрионов высшего качества имплантация не наступает и, наоборот, бывают случаи наступления и успешного развития беременности при переносе эмбрионов плохого качества. Поэтому существуют дополнительные способы прогноза имплантации эмбриона (time-laps, ПГС, анализ метаболитов и др.), которые дополняют морфологические критерии и обеспечивают в совокупности выбор лучшего эмбриона.

Бластоциста в процессе хетчинга (выхода из блестящей оболочки для имплантации)

А – световая микроскопия HMC контраст Б – Сканирующая электронная микроскопия - ZP – блестящая оболочка TE – трофэктодерма ВКМ – внутренняя клеточная масса

www.fertimed.ru


Смотрите также